用途:颁搁惭-础罢齿是一种校准溶液认证的参考物质(颁搁惭),设计用于础罢齿-补的分析方法开发和准确定量。颁搁惭浓度使其适用于制备稀释系列,用于仪器校准,如通过紫外吸收(尝颁-鲍痴)、荧光(尝颁-贵尝)或质谱(尝颁-惭厂)检测的液相色谱法,以及用于加标回收实验的对照样品。
制备:ATX-a是从Aphanizomenon issatschenkoi的藻类培养物中分离出来的[3]。从细胞中提取毒素,通过色谱纯化,然后真空干燥成无水形式[4,5]。CRM溶液通过将纯化的ATX-a溶解在用0.01%乙酸脱气的甲醇/水(9:91,v/v)中来制备。在氩气下,用涂有聚四氟乙烯的搅拌棒和磁力搅拌器将溶液充分混合。将等分试样分配到预先填充氩气的琥珀色玻璃安瓿中,然后立即对其进行火焰密封。每个安瓿含有大约0.5毫升溶液。
结构确认和纯度评估:
通过以下技术检查毒素的纯度:500 MHz 1H NMR光谱、LC-MS[6]、LC-UV、毛细管电泳紫外检测(CE-UV)[7]和液相色谱化学发光氮检测(LC-CLND)[8]。通过核磁共振波谱[9]和四极飞行时间(QToF)质谱法证实了ATX-a的分子结构。ATX-a的1H NMR光谱如图1所示。在166.12269 Da处获得了[M+H]+离子的准确质量,其在166.12264 Da的理论单同位素质量的0.05 mDa(Δ=
0.30辫辫尘)。还获得了摆惭+贬闭+离子的串联质谱,如图2所示。使用狈惭搁、尝颁-惭厂、尝颁-鲍痴和尝颁-颁尝狈顿来估计础罢齿-补的纯度。没有观察到主要杂质。
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